intronbio IR0441071說明書

LiliF™ Canine Coronavirus Ag rapid test kit

犬冠狀病毒診斷試劑盒產(chǎn)品信息

背景資料

犬冠狀病毒是冠狀病毒科的一種病毒，它在世界范圍內(nèi)導(dǎo)致狗的高度傳染性腸道疾病。它于1971年在德國哨兵犬爆發(fā)期間被發(fā)現(xiàn)。潛伏期為一至三天。這種疾病具有高度傳染性，通過感染犬的糞便傳播，感染犬通常會在病毒感染后6至9天內(nèi)排出病毒，但有時會感染6個月。癥狀包括腹瀉，嘔吐和厭食癥。診斷是通過檢測糞便中的病毒顆粒。

LiliF CCV Ag快速試劑盒是一種側(cè)流式免疫色譜分析試劑盒，用于快速和定性檢測犬體內(nèi)分泌物中的犬冠狀病毒抗原。

原理

有可能的使用

• 檢測犬冠狀病毒

解釋

套件內(nèi)容

犬冠狀病毒百科

犬冠狀病毒為單勝RNA病毒，有6～7種多肽，其中4種是糖肽，不含RNA聚合酶及神經(jīng)氨酸酶。犬冠狀病毒(canine coronavirus，CCV)是1種嚴(yán)重危害養(yǎng)犬業(yè)、經(jīng)濟(jì)動物養(yǎng)殖業(yè)和野生動物保護(hù)的病毒性傳染病病源 ^[1]  。可使犬發(fā)生程度不同的胃腸炎癥狀，特征有頻繁嘔吐、腹瀉、沉郁、厭食等癥狀。本病一年四季均可發(fā)生，以冬季多發(fā)，病犬是主要的傳染原，犬可通過呼吸道、消化道、糞便及污染物傳染。該病一但發(fā)生，同窩犬同室犬很難控制均可造成感染。該病經(jīng)常和犬細(xì)小病毒，輪狀病毒及其它胃腸道疾病混合感染。幼犬死亡率較高。

中文學(xué)名

犬冠狀病毒

別    稱

Canine coronavirus

界

病毒界

目

網(wǎng)巢病毒目

科

冠狀病毒科

屬

冠狀病毒屬

種

犬冠狀病毒

簡介

犬 冠狀 病 毒 (Caninecoronavi,l~S，CCV)屬 于尼 多病 毒 目

犬冠狀病毒

(Nidovirales)、冠 狀 病 毒 科 (Coronaviridae)、冠狀 病 毒 屬 (Coronavirus)、冠 狀 病 毒 I群 。CCV 由 Binn等 (1971)首先從腹瀉的德國軍犬中分離到的 ，病毒粒 子直 徑為 60～200nm，呈球 形 ，有囊膜 。核衣殼呈細(xì)絲狀 ．螺旋對稱 ，像其它囊膜病毒一樣。CCV 對熱 、脂溶劑 、非離子去污劑 、甲醛和氧化劑敏 感 ，對酸穩(wěn)定 ，在-70℃或 凍干后 在 4℃下可保存數(shù)年 。CCV 可在多種犬和貓的細(xì) 胞系中增殖 ，如原代犬腎細(xì)胞 ，犬胸腺和皮膚纖維瘤細(xì)胞 (A72)，貓肺細(xì)胞 (CRFK)等 。

犬冠狀病毒(CCV)基因組為一28～ 32 kb大小的單股正鏈RNA,基因在病毒自身RNA聚合酶的存在下、以先導(dǎo)引物轉(zhuǎn)錄機(jī)制進(jìn)行轉(zhuǎn)錄,不同的病毒基因組和亞基因組翻譯產(chǎn)生除病毒依賴RNA的RNA聚合酶以外,還產(chǎn)生其它病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,其中有相對比較保守、參與病毒核衣殼形成、介導(dǎo)宿主細(xì)胞免疫的核衣殼蛋白(N);在病毒出芽、組裝和成熟中起重要作用的膜蛋白(M);能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體,且易變異的纖突蛋白(S)，另外S蛋白還決定著病毒血清型、感染力,同時通過識別,并與病毒宿主細(xì)胞受體相互作用決定病毒感染的宿主范圍;參與病毒組裝的小膜蛋白(E)和其它病毒蛋白.CCV還可識別貓氨肽酶N(fAPN)并與之相互作用。 ^[2] 

發(fā)病特點

該病多發(fā)于寒冷的冬季 ，傳播迅速，數(shù)日內(nèi)常成窩暴發(fā) ；該病的發(fā)生雖無品種 、年齡、性別之分 ，但在犬群中流行時 ，通常都是幼犬先發(fā)病 ，然后波及其他年齡的犬。幼犬的發(fā)病率和致死率均高于成年犬。幼犬癥狀加劇，嘔吐和腹瀉是該病的主要癥狀，成年犬癥狀輕微 。該病的臨床癥狀和流行病學(xué)與輪狀病毒感染相似 ，而且常與輪狀病毒、犬細(xì)小病毒等混合感染 ，診斷較為困難。從動物回歸試驗來看，病毒接種后1d就出現(xiàn)臨床癥狀。所有攻毒犬撲殺后都有腸以及腸系膜淋巴結(jié)病變。但有1只犬沒有可觀察到的明顯癥狀 ，原因可能是該病毒需與細(xì)菌混合感染才表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀 ^[3]  。

犬冠狀病毒病因

犬冠狀病毒病是由犬冠狀病毒引起的，犬冠狀病毒可感染所有品種和各種年齡的狗（以幼犬受害嚴(yán)重），使狗產(chǎn)生輕重不一的胃腸炎癥狀，臨床上出現(xiàn)頻繁地嘔吐、腹瀉、沉郁、厭食，臨床癥狀消失后14～21天仍可復(fù)發(fā)，是目前危害狗的一大傳染病。感染途徑是消化道，主要是由于接觸了病狗排出的糞便及污染物所致。病毒在糞便里存活6～9天，污染物在水中可保持?jǐn)?shù)天的傳染性。犬冠狀病毒可與貓傳染性腹膜炎病毒和豬傳染性胃腸炎病毒的抗血清發(fā)生反應(yīng)，說明三者可能是一組病毒。該病毒對熱、紫外線和一般的化學(xué)藥品敏感。

癥狀

潛伏期1～8天。本病傳染迅速，數(shù)日內(nèi)可蔓延全群。一般先表現(xiàn)嗜睡、衰弱、反復(fù)嘔吐，以后糞便由糊狀、半糊狀至水樣，橙色或綠色，含黏液或血液，發(fā)燒或不發(fā)燒，白細(xì)胞減少，迅速脫水，死亡。隨著日齡的增長，死亡率降低。有的病例不表現(xiàn)臨床癥狀。犬冠狀病毒常和細(xì)小病毒一起混合感染，構(gòu)成犬腹瀉大流行。

治療

采用對癥療法，如止吐、止瀉、補(bǔ)液，用抗生素防止繼發(fā)感染，立即斷食斷水，冠狀病毒是腸胃病，必須斷食斷水，如果腸胃里面有食物和水分，病菌就會一直有而且拉稀更頻繁，之后帶到“正規(guī)獸醫(yī)站“輸液消炎和輸營養(yǎng)液，之后打血清，一般七天的療程就可以恢復(fù)，冠狀的治愈幾率在95%左右（獸醫(yī)站醫(yī)生說的），疫苗對犬冠狀病毒病沒有預(yù)防效果。減少發(fā)病的措施，就是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格執(zhí)行獸醫(yī)衛(wèi)生措施。

貓檢測

介紹

貓傳染性腹膜炎(FIP)是目前導(dǎo)致貓死亡的重要原因之一，從3個月到3齡貓以及大于10齡貓，特別是發(fā)生在那些純種貓和其它數(shù)量及種類繁多但養(yǎng)在一起的家養(yǎng)貓。貓冠狀病毒FeCV(Feline enteric Coronavirus)是高度傳染性病毒而且偏好發(fā)生在數(shù)量及種類繁多而且養(yǎng)在一起的家養(yǎng)貓。FeCV給貓帶來了極大的危險，F(xiàn)eCV陽性通常被認(rèn)為是FIP的前奏。要控制貓F(tuán)IP根本的方法就是要做好FeCV的預(yù)防和控制。FeCV是廣泛的貓冠狀病毒Feline Coronavirus (FCoV)中的一種，F(xiàn)eCV抗體的存在僅表示有FeCV病毒存在和/或感染了FIP的可能性。對FeCV抗體呈陽性結(jié)果也不一定表示貓得到了FeCV病毒和/或感染了FIP，應(yīng)該要和其它臨床癥狀結(jié)合起來一齊判斷。但陰性結(jié)果可說明沒有FeCV病毒和/或感染了FIP。

檢測原理

酶標(biāo)板的孔中包被有純化的冠狀病毒抗原。從金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus提取的蛋白A與HRP結(jié)合成復(fù)合物。血清或血漿樣品和蛋白A酶標(biāo)記物一起在酶標(biāo)板的孔中孵育。如果貓樣品里存在FCoV抗體，抗體將與孔中的抗原結(jié)合，再與蛋白A酶標(biāo)記物結(jié)合。多余的酶標(biāo)記蛋白A被洗掉，加入發(fā)色底物。清晰的藍(lán)色表示FCoV抗體存在，沒有顏色變化表明沒有FCoV抗體。

該試劑盒具有高特異性和靈敏度，操作簡單，30分鐘內(nèi)可以知道結(jié)果。試劑盒里包括陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控，僅需肉眼通過與陰性質(zhì)控顏色進(jìn)行比較，就可以準(zhǔn)確地判斷樣品里FCoV抗體的存在。

樣品

需1ul血清或血漿，只能檢測貓的樣品。樣品可在2-8C保存7天，如果需要更長的保存，樣品可保存在-20C。嚴(yán)重紅細(xì)胞溶解或脂溶血會產(chǎn)生干擾的顏色，所以盡可能去得到更好質(zhì)量的樣品。

準(zhǔn)備洗滌液

讓洗滌濃縮液達(dá)到室溫，輕輕地倒置混勻。用蒸餾水或去離子水稀釋洗滌濃縮液（1份洗滌濃縮液加至9份水中），稀釋后的洗滌液可保存于2-7上升℃。

結(jié)果

a. 檢測的有效性必須是：陽性質(zhì)控孔里的液體呈清晰的藍(lán)色，而陰性質(zhì)控孔里的液體保持清澈。

b. 假若樣品孔的顏色變化比陰性質(zhì)控孔深很多則表明，該動物以前或目前正受到FCoV感染，并且有可能通過排泄物傳播病毒。此時便需要與其它的臨床數(shù)據(jù)結(jié)合起來以確診FIP。

c. 如果樣品孔里無顏色變化表明沒有感染FIP疾病。

試劑盒組份

以下內(nèi)容物包含在試劑盒里：

包被好的酶標(biāo)板 8x12孔

陽性質(zhì)控血清 1.5ml

陰性質(zhì)控血清 7.0ml

蛋白A HRP標(biāo)記物 5.0ml

TMB 7.0ml

底物緩沖液 7.0ml

濃縮洗滌液 100.0ml

注意事項

* 試劑盒使用前恢復(fù)至室溫（21-25C）

* 不同樣品使用不同的加樣器頭

* 不要把試劑盒直接暴露在陽光下

* 不要使用過期的試劑或不同試劑盒里試劑一齊混雜使用

* 嚴(yán)格按照步驟操作，不適當(dāng)?shù)南礈旎蛟噭┪廴緦a(chǎn)生非專一性的顏色

* 獸醫(yī)使用

保存和穩(wěn)定性

將試劑盒和稀釋的洗滌液保存于2-7℃，不要冷凍。只要在適當(dāng)保存條件下，試劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

參考資料

• 1.  犬瘟熱一犬冠狀病毒雙重PCR診斷方法的建立及初步應(yīng)用  ．萬方數(shù)據(jù)庫[引用日期2019-03-12]
• 2.  犬冠狀病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展  ．萬方數(shù)據(jù)庫[引用日期2019-03-12]
• 3.  犬冠狀病毒的分離及鑒定  ．維普[引用日期2019-03-12]

學(xué)術(shù)論文

內(nèi)容來自 

•  胡桂學(xué)，高鳳山，夏咸柱等.    大熊貓犬冠狀病毒的分離與鑒定． 《 畜牧獸醫(yī)學(xué)報 》 ， 2004
•  
•  喬軍，孟慶齡，夏咸柱等.    犬瘟熱、犬冠狀病毒聯(lián)合RT—PCR檢測方法的建立及應(yīng)用． 《 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報 》 ， 2002
•  
•  高鳳山，胡桂學(xué)，夏咸柱等.    聯(lián)合PCR診斷大熊貓犬瘟熱和犬冠狀病毒的混合感染． 《 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 》 ， 2003
•  
•  胡桂學(xué)，高鳳山，夏咸柱等.    大熊貓犬冠狀病毒的分離與鑒定． 《 吉林省畜牧獸醫(yī)學(xué)會學(xué)術(shù)年會 》 ， 2003
•  
•  范志強(qiáng)，夏咸柱，武銀蓮等.    檢測犬冠狀病毒中和抗體的方法與應(yīng)用． 《 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報 》 ， 1998