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PolyPlus FectoPRO產品

 更新時間:2019-10-11 點擊量:4530

 

PolyPlus-transfection(PT)是一家位于法國的生物技術公司,目前已經通過了ISO9001:2000質量體系認證。該公司擁有十幾年的的轉染試劑研發經驗,已經開發了一系列的轉染試劑,如:基因的體內和體外轉染試劑、寡核苷酸轉染試劑和siRNA轉染試劑等,可以根據不同的需要獲得穩定或瞬時的轉染效果

PolyPlus FectoPRO產品

High yields in suspension CHO & HEK-293

  • 驚人的蛋白質和抗體產量
  • 使用較少的質粒DNA量進行具有成本效益的瞬時基因表達
  • 與多種哺乳動物表達培養基和細胞系統兼容
  • 符合生物制造準則
  • 適用于高密度電池系統

技術指標

試劑

FectoPRO ®

分子交付

脫氧核糖核酸

應用領域

生物生產

細胞類型

懸浮液CHO,HEK-293及其衍生物

轉染數

1毫升FectoPRO的®足以轉染800毫升到1升以上的細胞培養的

存儲

5°C±3°C,適當存放可穩定1-2年

提供

FectoPRO ®助推器

摘要

使用瞬時轉染和基因表達獲得的蛋白質產量

FectoPRO®轉染試劑盒專門設計用于使用低DNA量(<1 µg / ml細胞培養物)在各種無血清培養基中的CHO和HEK-293懸浮細胞中增強瞬時基因表達(TGE)。

FectoPRO®介導的轉染過程可輕松擴展至幾毫升到幾升的細胞培養,確保強大的可重復生產蛋白質。更高的生產率和對DNA的低要求使FectoPRO®成為生物生產過程中具有成本效益的解決方案。

訂購信息:

 

ProductReference NumberTransfection ReagentExpression BoosterExpression Medium
FectoPRO® Reagent116-0011 ml1 ml-
FectoPRO® Reagent116-01010 ml10 ml-
FectoPRO® Reagent116-0404 x 10 ml4 x 10 ml-
FectoCHO® CD Medium716-01L--1 L
FectoCHO® CD Medium716-06L--6 x 1 L
FectoCHO® Expression System716-01LKIT1 ml1 ml1 L
FectoCHO® Expression System716-06LKIT5 x 1 mL5 x 1 mL6 x 1 L

 

驚人的蛋白質產量

FectoPRO ®使驚人的高蛋白質和抗體的產率在兩個CHO和HEK-293細胞在無血清培養基中懸浮培養的(圖1)。

FectoPRO-抗體產生CHO細胞圖1 FectoPRO ®給出了在懸浮的CHO細胞驚人抗體生產產量。將細胞以1×106細胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表達培養基中接種,并用FectoPRO染®(0.8微克DNA / ml)或的FreeStyle™MAX試劑(1.25微克DNA / ml)的下列推薦的方案針對各個試劑。重組小鼠IgG產率,使用蛋白G的生物傳感器(福特生物轉染后1?6天測定®八位字節RED96系統)。FreeStyle™是Life Technologies™Corporation的商標。數據由ProteoGenix SAS(法國)友善提供。

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FectoPRO ®很大程度上優于其它轉染試劑如線性PEI在生物生產過程中常用的轉染效率(圖2)而言,導致優異的蛋白質生產產率(圖3)。

FectoPRO-Microscopie圖2 FectoPRO ®給出了在懸浮的CHO細胞轉染效率高。的FreeStyle™CHO-S細胞以1×10接種6個細胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表達培養基中,并用FectoPRO轉染® + FectoPRO ®使用0.4微克/毫升和1.25微克/毫升的助推器或的FreeStyle™MAX試劑表達GFP的質粒。轉染24小時后,使用熒光顯微術測定GFP表達。

FectoPRO-CHO細胞

FectoPRO-HEK-293F細胞圖3 FectoPRO ®給出在懸浮液中的CHO和HEK-293細胞優于蛋白質生產的產率。的FreeStyle™CHO-S和HEK-293F細胞以1×10接種6個細胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO或293表達培養基并用FectoPRO轉染® + FectoPRO ®助推器(0.4微克DNA /毫升),自由式™ MAX試劑(1.25微克DNA / ml)或PEIpro ®(1個微克DNA /毫升)以下推薦的協議用于相應的試劑。在轉染后72小時(CHO細胞)和120小時(HEK-293細胞),通過蛋白G親和定量(HPLC)和Western Blot測定IgG3-Fc(34kDa)的產生。標準對應于純化的IgG3-Fc(34 kDa)。

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經濟:使用少量質粒DNA

高質量質粒DNA的制備可能非常昂貴,尤其是在大量DNA大量生產大量蛋白質需要大量質粒的情況下。FectoPRO ®節省40?60%的DNA成本通過使用0.4至0.6微克DNA / 10 6個細胞/ ml的細胞培養物; 因此,使該套件成為生物生產過程中可承受且經濟的解決方案。

FectoPRO-表比較競爭對手表1 DNA的量和試劑(FectoPRO的體積®和競爭對手)根據生產商的建議轉染。

持續的蛋白質生產

蛋白質生產過程的持續時間在過去幾年中有所增加,現在大多數蛋白質生產過程會持續1-2周,以獲得量的蛋白質生產。FectoPRO ®已經發展到保證持續生產蛋白質在幾天內,同時保持較高的細胞活力,可以長期保存蛋白生產(圖4)。

FectoPRO-HEK-293中的生產+可行性圖4 FectoPRO ®給出了在懸浮細胞持續蛋白質生產。的FreeStyle™HEK-293F細胞以1×10 6個細胞/ ml的30毫升的FreeStyle™293表達培養基的接種,并用FectoPRO轉染® + FectoPRO ®按照標準方案助推器(0.5微克DNA /毫升)中。在不同的時間點后,通過蛋白G親和定量(HPLC)測定IgG3-Fc的產生。FreeStyle™CHO-S可獲得類似的結果(數據未顯示)。

輕松擴展

強大的協議可輕松適應各種培養皿,從而簡化您的生物生產過程。FectoPRO ®介導的轉染,可以線性地從30毫升放大到升細胞培養物的無協議適配(圖5)。

FectoPRO-CHO的可行性 FectoPRO-CHO蛋白生產

FectoPRO-可擴展性圖5 FectoPRO ®是在CHO細胞中易于擴展和重現的。的FreeStyle™CHO-S細胞以1×10接種6個細胞/ ml在30毫升100毫升300毫升或1升的FreeStyle™CHO表達培養基中,并用FectoPRO轉染® + FectoPRO ®助推器(0.5微克DNA / ml)的。在第1至6天,使用臺盼藍排除法(A)測定細胞活力,并通過蛋白G親和定量(HPLC)(B)和Western Blot(C)測定IgG3-Fc的產生。標準品(C)對應于純化的IgG3-Fc(34 kDa)。

可重復生產的產量

FectoPRO ®制造和使用配制高度控制生產過程。這樣可確保實驗之間的結果均具有高度可重復性。此外,為了滿足當前的管理指南,FectoPRO ®使用釋放先進的質量控制包括用于蛋白質生產率的規范,保證優良批與批之間的一致性(圖6)。

FectoPRO-批次間的可復制性圖6. FectoPRO ®提供優異的批與批的重現。懸浮CHO細胞以1×10接種6個細胞/ ml在30ml CHO培養基中,并使用3個不同批次FectoPRO的轉染®(CCIII 078,CCIII 104或CCIII 106)按照標準方案。轉染72小時后,通過蛋白G親和力定量測定IgG3-Fc的產生。在懸浮的HEK-293細胞上獲得了相似的結果(數據未顯示)。

與哺乳動物表達系統兼容

不像其它可商購的試劑,FectoPRO ®轉染試劑盒是適合于CHO和HEK-293細胞(圖2和3)。該試劑與各種培養基配方兼容; 因此,實驗室的實施非常簡單明了(圖7,表2)。

FectoPRO-蛋白質生產圖7 FectoPRO ®給出了在不同培養基中生長的懸浮的CHO細胞優于蛋白質生產的產率。CHO細胞以1×10接種6個細胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表達培養基中,CD CHO培養基或Pro-CHO™4培養基并用FectoPRO轉染® + FectoPRO ®助推器或的FreeStyle™MAX試劑以下對推薦的方案各自的試劑。轉染72小時后,通過蛋白G親和定量(HPLC)測定IgG3-Fc的產生。

FectoPRO-臺式媒體CHO使用FectoPRO表2蛋白質產量®在不同培養基中的CHO細胞。

FectoPRO-臺式媒體HEK使用FectoPRO表3.蛋白質產量®在不同培養基中于HEK-293細胞。

發現我們的套件致力于CHO細胞:FECTOCHO ®表達系統

自由式TM,CD FortiCHO TM,CD的OptiCHO TM,Expi293 TM,ExpiCHO TM和CD293是Gibco公司的商標®
Pro-CHO TM,PowerCHO TM和Pro293 TM是Lonza TM Group的商標。
HyClone TM,HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM的商標
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商標TM

FectoPRO ®也非常適合病毒生產

 

 

 

 

 

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