polyplus-transfection FectoPRO說(shuō)明書(shū)
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| 試劑 | FectoPRO ® |
|---|---|
| 分子交付 | 脫氧核糖核酸 |
| 應(yīng)用 | 生物生產(chǎn) |
| 細(xì)胞類型 | 懸浮液 CHO、HEK-293 和衍生物 |
| 轉(zhuǎn)染次數(shù) | 1 mL FectoPRO ®足以將 800 mL 的細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)染超過(guò) 1 L |
| 貯存 | 5°C ± 3°C，如果儲(chǔ)存得當(dāng)，自生產(chǎn)之日起可穩(wěn)定 3 年 |
| 提供 | FectoPRO ®助推器 |
使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)產(chǎn)量。
FectoPRO轉(zhuǎn)染試劑專為使用低 DNA 量（< 1 µg/ml 細(xì)胞培養(yǎng)物）在各種無(wú)血清培養(yǎng)基中的懸浮 CHO 和 HEK-293 細(xì)胞中增強(qiáng)瞬時(shí)基因表達(dá) (TGE)而設(shè)計(jì)。
FectoPRO® 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染過(guò)程可以輕松地從幾毫升細(xì)胞培養(yǎng)物擴(kuò)展到幾升細(xì)胞培養(yǎng)物，確保強(qiáng)大的可重復(fù)蛋白質(zhì)生產(chǎn)。更高的生產(chǎn)力和低 DNA 量要求使 FectoPRO® 成為生物生產(chǎn)過(guò)程的經(jīng)濟(jì)高效的解決方案。
| 參考編號(hào) | 產(chǎn)品 | 轉(zhuǎn)染試劑 | 表達(dá)助推器 | 表達(dá)培養(yǎng)基 |
|---|---|---|---|---|
| 116-001 | FectoPRO® 試劑 | 1 毫升 | 1 毫升 | —— |
| 116-010 | FectoPRO® 試劑 | 10 毫升 | 10 毫升 | —— |
| 116-100 | FectoPRO® 試劑 | 100 毫升 | 100 毫升 | —— |
| 716-06L | FectoCHO® CD 培養(yǎng)基 | —— | —— | 6 x 1 升 |
| 716-01LKIT | FectoCHO® 表達(dá)系統(tǒng) | 1 毫升 | 1 毫升 | 1升 |
FectoPRO ®在無(wú)血清培養(yǎng)基中懸浮生長(zhǎng)的 CHO 和 HEK-293 細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了驚人的高蛋白質(zhì)和抗體產(chǎn)量（圖 1）。
圖 1. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細(xì)胞中產(chǎn)生驚人的抗體產(chǎn)量。將細(xì)胞以 1 x 10 6細(xì)胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達(dá)培養(yǎng)基中，并按照各自推薦的方案用 FectoPRO ® (0.8 µg DNA/ml) 或 FreeStyle™ MAX 試劑 (1.25 µg DNA/ml)轉(zhuǎn)染試劑。使用蛋白 G 生物傳感器（fortéBIO ®octet RED96 系統(tǒng)）在轉(zhuǎn)染后 1 至 6 天測(cè)定重組小鼠 IgG 的產(chǎn)量。FreeStyle™ 是 Life Technologies™ Corporation 的商標(biāo)。數(shù)據(jù)由 ProteoGenix SAS（法國(guó)）友情提供。
探索我們專用于 cho 細(xì)胞的試劑盒：FectoCHO ®表達(dá)系統(tǒng)
在轉(zhuǎn)染效率方面，FectoPRO ®在很大程度上優(yōu)于其他轉(zhuǎn)染試劑，例如生物生產(chǎn)過(guò)程中常用的線性 PEI（圖 2），從而導(dǎo)致更高的蛋白質(zhì)產(chǎn)量（圖 3）。
圖 2. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細(xì)胞中提供高轉(zhuǎn)染效率。將 FreeStyle™ CHO-S 細(xì)胞以 1 x 10 6 個(gè)細(xì)胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達(dá)培養(yǎng)基中，并使用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX Reagent 使用 0.4 µg/ml 和 1.25 µg/ml分別是 GFP 表達(dá)質(zhì)粒。使用熒光顯微鏡在轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)測(cè)定 GFP 表達(dá)。
圖 3. FectoPRO ®在懸浮 CHO 和 HEK-293 細(xì)胞中提供了蛋白質(zhì)產(chǎn)量。FreeStyle™ CHO-S 和 HEK-293F 細(xì)胞以 1 x 10 6細(xì)胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ CHO 或 293 表達(dá)培養(yǎng)基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.4 µg DNA/ml)、FreeStyle™轉(zhuǎn)染MAX Reagent (1.25 µg DNA/ml) 或 PEIpro ® (1 µg DNA/ml) 遵循各自試劑的推薦方案。在轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí)（CHO 細(xì)胞）和 120 小時(shí)（HEK-293 細(xì)胞），通過(guò)蛋白 G 親和定量 (HPLC) 和蛋白質(zhì)印跡分析 IgG3-Fc (34 kDa) 的產(chǎn)生。標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
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高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA 制備可能非常昂貴，尤其是當(dāng)大規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)需要大量 DNA 和許多質(zhì)粒時(shí)。FectoPRO ®使用 0.4 至 0.6 µg DNA / 10 6細(xì)胞 / ml 細(xì)胞培養(yǎng)物可節(jié)省 40 至 60% 的 DNA 成本；因此使該套件成為生物生產(chǎn)過(guò)程的經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的解決方案。
表 1.根據(jù)制造商的建議，用于轉(zhuǎn)染的 DNA 量和試劑量（FectoPRO ®和競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手）。
蛋白質(zhì)生產(chǎn)過(guò)程的持續(xù)時(shí)間在過(guò)去幾年有所增加，現(xiàn)在大多數(shù)蛋白質(zhì)生產(chǎn)過(guò)程持續(xù) 1-2 周以獲得最佳蛋白質(zhì)生產(chǎn)量。FectoPRO ® 的開(kāi)發(fā)旨在確保持續(xù)數(shù)天的蛋白質(zhì)生產(chǎn)，同時(shí)保持高細(xì)胞活力以實(shí)現(xiàn)更持久的蛋白質(zhì)生產(chǎn)（圖 4）。
圖 4. FectoPRO ®在懸浮細(xì)胞中提供持續(xù)的蛋白質(zhì)生產(chǎn)。FreeStyle™ HEK-293F 細(xì)胞以 1 x 10 6細(xì)胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ 293 表達(dá)培養(yǎng)基中，并按照標(biāo)準(zhǔn)方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉(zhuǎn)染。在不同時(shí)間點(diǎn)后通過(guò)蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 測(cè)定 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。使用 FreeStyle™ CHO-S 獲得了類似的結(jié)果（數(shù)據(jù)未顯示）。
使用可輕松適應(yīng)各種培養(yǎng)容器的強(qiáng)大方案簡(jiǎn)化您的生物生產(chǎn)過(guò)程。FectoPRO ®介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染可以從 30 毫升線性擴(kuò)展到升細(xì)胞培養(yǎng)物，無(wú)需修改方案（圖 5）。
圖 5. FectoPRO ®在 CHO 細(xì)胞中易于擴(kuò)展和重現(xiàn)。FreeStyle™ CHO-S 細(xì)胞以 1 x 10 6 個(gè)細(xì)胞/ml接種在 30 ml、100 ml、300 ml 或 1 L FreeStyle™ CHO 表達(dá)培養(yǎng)基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉(zhuǎn)染. 在第 1 天至第 6 天，使用臺(tái)盼藍(lán)排除測(cè)定法測(cè)定細(xì)胞活力，并通過(guò)蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 和蛋白質(zhì)印跡法測(cè)定 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
FectoPRO ®是使用高度受控的生產(chǎn)過(guò)程制造和配制的。這確保了從實(shí)驗(yàn)到實(shí)驗(yàn)的高度可重復(fù)的結(jié)果。此外，為了滿足當(dāng)前的監(jiān)管指南，F(xiàn)ectoPRO ®發(fā)布時(shí)采用了先進(jìn)的質(zhì)量控制，包括蛋白質(zhì)生產(chǎn)力規(guī)范，以保證批次間的出色一致性（圖 6）。
圖 6. FectoPRO ®具有出色的批次間重現(xiàn)性。懸浮CHO細(xì)胞以1 x 10 6細(xì)胞/ml接種在30ml CHO培養(yǎng)基中，并按照標(biāo)準(zhǔn)方案使用3個(gè)不同批次的FectoPRO ® (CCIII 078、CCIII 104或CCIII 106)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí)，通過(guò)蛋白 G 親和力定量分析 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。在懸浮的 HEK-293 細(xì)胞上獲得了類似的結(jié)果（數(shù)據(jù)未顯示）。
與其他市售試劑不同，F(xiàn)ectoPRO ®轉(zhuǎn)染試劑盒適用于 CHO 和 HEK-293 細(xì)胞（圖 2 和 3）。該試劑兼容多種培養(yǎng)基配方；因此，實(shí)驗(yàn)室實(shí)施簡(jiǎn)單明了（圖 7，表 2）。
圖 7. FectoPRO ®在不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的懸浮 CHO 細(xì)胞中提供了蛋白質(zhì)產(chǎn)量。將 CHO 細(xì)胞以 1 x 10 6細(xì)胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達(dá)培養(yǎng)基、CD CHO 培養(yǎng)基或 Pro-CHO™ 4 培養(yǎng)基中，并按照推薦的方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX 試劑轉(zhuǎn)染各自的試劑。在轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí)通過(guò)蛋白 G 親和定量 (HPLC) 測(cè)定 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。
表 2.在不同培養(yǎng)基中使用 FectoPRO ®培養(yǎng) CHO 細(xì)胞的蛋白質(zhì)產(chǎn)量。
表 3. HEK-293 細(xì)胞在不同培養(yǎng)基中使用 FectoPRO ® 的蛋白質(zhì)產(chǎn)量。
探索我們專用于 CHO 細(xì)胞的試劑盒：FectoCHO ®表達(dá)系統(tǒng)
FreeStyle TM、CD FortiCHO TM、CD OptiCHO TM、Expi293 TM、ExpiCHO TM和CD293 是Gibco ® 的商標(biāo)。
Pro-CHO TM、PowerCHO TM和 Pro293 TM是 Lonza TM Group 的商標(biāo)。
HyClone TM、HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM 的商標(biāo)。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商標(biāo)TM。
蛋白質(zhì)生產(chǎn)包括在細(xì)胞系中以小/中到大規(guī)模過(guò)表達(dá)重組蛋白質(zhì)或肽。產(chǎn)生的生物分子可用于研究目的，如結(jié)構(gòu)表征，一直到治療或醫(yī)學(xué)應(yīng)用。
FectoPRO ®符合生物制造指南。事實(shí)上，F(xiàn)ectoPRO ®保證不含動(dòng)物源成分，并且是化學(xué)成分確定的。對(duì)生產(chǎn)的每個(gè)批次進(jìn)行系統(tǒng)的批次管理和放行測(cè)試。此外，F(xiàn)ectoPRO ®轉(zhuǎn)染試劑盒經(jīng)過(guò)先進(jìn)的質(zhì)量控制：蛋白質(zhì)生產(chǎn)力、細(xì)胞活力和*無(wú)菌。
此外，Polyplus-transfection ®自 2002 年起獲得 ISO 9001 質(zhì)量管理體系認(rèn)證；這一級(jí)別的認(rèn)證向全球客戶保證，供應(yīng)商已為產(chǎn)品開(kāi)發(fā)、制造、銷售和客戶支持建立了可靠且有效的流程。
